1、首次培养红休菌菌种需购买。 菌液和菌膜（菌液上面漂浮的一层像海蜇一样的膜）都可以作为菌种，最好是二者同时作菌种。菌液与培养液按1:4的比例在培养容器中混合均匀，菌膜用量不少于容器截面积的一半。然后用干净纱布或手帕盖住容器口，扎紧，这样既能防尘土、防止果蝇钻入产卵孵蛆，还可以保证通气，有利于菌膜形成。接种完毕，放在无阳光直射的地方，在28℃左右的温度下静止培养，不要动它。家庭培养红茶菌，随季节的变化，必须采取相应的措施，使温度维持在25～32℃之间，不可过高或过低，这样才能使红茶菌在10天成熟。
2、当菌膜呈乳白色，菌液不冒气泡，澄清透明，颜色比原来的茶水浅，酸味浓，说明已发酵成熟。也可用PH值试纸测定其PH值，如果已达到3.0以下则表示已成熟。已发酵成熟的红茶菌，将其菌液小心地由培养容器倾入保存菌液的容器中，注意不要使底部淡褐色的沉淀物随菌液流出。此菌液在室温下可保存2个月或更长时间，可以陆续饮用。如放置时间较长，菌液表层重新长出薄薄的菌膜，并不影响质量。
3、菌液顷出后，把手洗净或用消毒后的镊子把菌膜取出，摘除菌膜上面变褐的部分，再用凉开水冲洗菌膜数遍。把容器底部沉淀物倒掉，容器用凉开水洗干净，倒入菌液、培养液及处理好的菌膜，又可按上述方法继续培养红茶菌。
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